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针对衰老导致内皮祖细胞（EPCs）数量功能下降、移植疗效不佳，且益气活血汤（GSC）抗血管衰老机制未明的问题，先体外用 D - 半乳糖（D-gal）诱导 EPCs 衰老，设 GSC 组、二甲双胍（Met，阳性对照）组，检测衰老标志物、线粒体功能及分裂相关分子，加 AMPK 抑制剂验证通路；再体内用 D-gal 构建衰老小鼠模型，自体移植经 GSC 干预的 EPCs，检测主动脉病理及血管功能指标。结果显示，GSC 通过激活 AMPK 通路，降低线粒体分裂分子 Drp1、Mff、Fis1 表达，抑制线粒体过度分裂，改善 EPCs 衰老和线粒体功能，且 AMPK 抑制剂可逆转该效应；体内 GSC 还能优化 EPCs 移植效果，减轻小鼠主动脉结构紊乱、降低内膜中层厚度（IMT），提升抗氧化能力和血管内皮功能，效果优于 Met。最终证实 GSC 通过 AMPK 通路抑制线粒体分裂改善 EPCs 衰老，为血管衰老相关疾病提供新治疗方向。

研究设计

体外实验：用 D - 半乳糖（D-gal）诱导小鼠骨髓来源 EPCs 衰老，设对照组、模型组、GSC 组、二甲双胍（Met，阳性对照）组，检测衰老标志物（P16、P21、P53、SA-β-gal）、线粒体功能（mtROS、线粒体膜电位 MMP、ATP）及分裂融合相关分子（Drp1、Mff、Fis1、Mfn1/2、Opa1）的 mRNA 和蛋白表达，检测 AMPK/p-AMPK 表达，加 AMPK 抑制剂（Compound C）验证通路作用；体内实验：用 D-gal 构建衰老小鼠模型，提取模型小鼠骨髓 EPCs，经 GSC、Met 或培养基干预后自体尾静脉移植，设模型组、模型 + EPCs 组、模型 + EPCs+GSC 组、模型 + EPCs+Met 组，14 天后检测小鼠主动脉病理（HE 染色、IMT）、氧化应激（SOD、MDA）、血管功能（NO、ET-1）及相关分子（AGEs、MMP-2、P53、P21）表达，明确 GSC 对 EPCs 移植效果的影响。

研究结果

体外：D-gal 诱导 EPCs 衰老，表现为衰老标志物表达升高、线粒体过度分裂（Drp1、Mff、Fis1 升高）、线粒体功能下降（mtROS 升高，MMP、ATP 降低）、AMPK 磷酸化降低，GSC 和 Met 可逆转上述变化，且 GSC 改善线粒体功能和细胞黏附能力优于 Met，加入 AMPK 抑制剂后，GSC 和 Met 的改善作用被阻断；体内：衰老小鼠主动脉结构紊乱、IMT 增厚，氧化应激增强（SOD 降低、MDA 升高）、血管功能异常（NO 降低、ET-1 升高），EPCs 自体移植可改善上述指标，经 GSC 干预的 EPCs 移植效果更优，进一步降低 IMT、AGEs、MMP-2 及衰老标志物（P53、P21）表达，提升 SOD 和 NO 水平，且效果优于 Met 组。

Fig.1：展示整体实验设计，包括体外 EPCs 经 D-gal 诱导衰老后，用 GSC/Met 干预及 AMPK 抑制剂验证的分组，和体内衰老小鼠 EPCs 自体移植的分组、流程及检测时间点。

Fig.2：证实 GSC 可改善 D-gal 诱导衰老 EPCs 的线粒体功能，具体表现为降低 mtROS 水平，升高 MMP 和 ATP 含量，且改善效果优于阳性对照药 Met。

Fig.3：表明 GSC 能抑制 D-gal 诱导的 EPCs 线粒体过度分裂，显著降低分裂相关分子 Drp1、Mff、Fis1 的 mRNA 和蛋白表达，对融合相关分子 Mfn1、Mfn2、Opa1 无显著影响。

Fig.4：显示 GSC 可升高衰老 EPCs 的 AMPK 磷酸化水平，且 AMPK 抑制剂会逆转 GSC 和 Met 对 EPCs 增殖、黏附、迁移功能的改善作用。

Fig.5：验证 AMPK 抑制剂可阻断 GSC 和 Met 对衰老 EPCs 线粒体功能的改善，使 mtROS 回升、MMP 和 ATP 下降。

Fig.6：证明 AMPK 抑制剂会逆转 GSC 和 Met 对 AMPK 通路的激活，以及对线粒体分裂分子 Drp1、Fis1 的抑制，同时破坏线粒体形态的恢复。

Fig.7：表明 AMPK 抑制剂可抵消 GSC 和 Met 对衰老 EPCs 的抗衰作用，使 SA-β-gal 染色阳性率及衰老标志物 P16、P21、P53 表达回升。

Fig.8：证实经 GSC 干预的 EPCs 移植可改善衰老小鼠主动脉结构（减轻紊乱、降低 IMT），提升血清 SOD 和 NO 水平，降低 MDA 和 ET-1 水平，效果优于 Met 组。

Fig.9：显示 GSC 干预的 EPCs 移植能更有效降低衰老小鼠主动脉 AGEs、MMP-2 及衰老标志物 P53、P21 的表达，对 VEGF 无显著影响。

Fig.10：以机制示意图总结 GSC 的作用通路 —— 通过激活 AMPK 磷酸化抑制线粒体分裂，改善 EPCs 衰老和功能，进而优化其在血管衰老小鼠中的自体移植疗效。

研究结论

讨论指出，GSC 通过激活 AMPK 通路抑制 Drp1 介导的线粒体过度分裂，改善 D-gal 诱导的 EPCs 衰老和线粒体功能，且效果优于临床抗衰药物 Met，同时 GSC 干预的 EPCs 自体移植能更有效改善衰老小鼠主动脉病理、氧化应激及血管功能，其机制与调节线粒体分裂平衡、提升抗氧化能力相关；还提及线粒体动力学调控衰老存在争议，不同细胞来源、建模条件可能导致结果差异，GSC 中人参皂苷 Rg3、三七总皂苷或与线粒体分子表达差异相关，且 AMPK 通路对线粒体分裂的双向调控可能与细胞类型及模型有关。研究局限性在于 D-gal 诱导的衰老小鼠模型与人类自然衰老存在差异，需临床验证；EPCs 移植的时间点、细胞数量及联合干预方案可进一步优化；但本研究仍为血管衰老相关疾病的干细胞治疗提供了新方向，为 GSC 的临床应用提供了实验依据。

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